人类白细胞抗原A(HLA-A)elisa试剂盒说明书目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中HLA-A的含量。上海研谨生物高品质ELISA试剂盒供应商，品质卓越，售后完善。欢迎垂询：021－60544098 可免费代测服务。本试剂仅供研究使用实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人类白细胞抗原A(HLA-A)水平。用纯化的人类白细胞抗原A(HLA-A)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入HLA-A，再与HRP标记的HLA-A抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的HLA-A呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人HLA-A浓度。elisa试剂盒组成：样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100 l，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50 l，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100 l分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50 l，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50 l弃掉，再各取50 l分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50 l分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50 l，混匀后从第七、第八孔中分别取50 l加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50 l，混匀后从第九第十孔中各取50 l弃掉。（稀释后各孔加样量都为50 l，浓度分别为9ng/mL，6ng/mL，3ng/mL，1.5ng/mL，0.75ng/mL）。2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40 l，然后再加待测样品10 l（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50 l，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50 l，再加入显色剂B50 l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50 l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（ n 5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。（此图仅供参考）试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：0.5ng/mL-10ng/mL保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月以上文章由上海研谨生物科技有限公司整理上传，上海研谨生物科技有限公司专业销售各种品牌的ELISA试剂盒。服务于高校及免疫学科研单位。品质保证，售后服务完善。并可以免费代检测，更好的为您服务。更多产品，详细请点击公司网址：http://www.021yjsw.com咨询热线：021-60544098:13585717991传真：021-60544068E-mail：yanjinbio@163.com