鸭病毒性肝炎(DVh)ELISA试剂盒说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于检测鸭血清，血浆及相关液体样本中病毒性肝炎(DVh)水平。上海研谨生物高品质ELISA试剂盒供应商，品质卓越，售后完善。欢迎垂询：021－60544098 手机：13585717991 提供免费代检测服务。实验原理：本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中鸭病毒性肝炎(DVh)。用纯化的鸭病毒性肝炎(DVh)抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中病毒性肝炎(DVh)相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的病毒性肝炎(DVh)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中鸭病毒性肝炎(DVh)的存在与否。试剂盒组成：样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤：1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50 l。然后在待测样品孔先加样品稀释液40 l，然后再加待测样品10 l。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50 l，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50 l，再加入显色剂B50 l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟10.终止：每孔加终止液50 l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。结果判定：试验有效性：阳性对照孔平均值 1.00;阴性对照平均值 0.10临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15阴性判定：样品OD值 临界值（CUTOFF）者为病毒性肝炎(DVh)阴性阳性判定：样品OD值 临界值（CUTOFF）者为病毒性肝炎(DVh)阳性注意事项1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5．底物请避光保存。6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月上海研谨生物科技有限公司专业销售各种品牌价格档次的ELISA试剂盒。服务于高校及免疫学科研单位。品质保证，售后服务完善。并可以免费代检测，更好的为您服务。咨询热线：021-60544098手机:13585717991传真：021-60544068E-mail：yanjinbio@163.com